β-淀粉酶測(cè)試盒微量法實(shí)驗(yàn)科研
測(cè)定意義:淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。
測(cè)定原理:還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐熱。根據(jù)上述特性,鈍化其中之一,就可測(cè)出另一種淀粉酶的活力。
β-淀粉酶測(cè)試盒微量法實(shí)驗(yàn)科研
需要的儀器,耗材:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
樣本處理
稱(chēng)取約 0.1g 樣本,加入 0.8mL 蒸餾水,研磨勻漿;將勻漿倒入離心管中,提取液在室溫下放置提取 15min, 每 5min 振蕩 1 次,使其充分提取;6000g,常溫離心 10min,取上清液加蒸餾水定容至 10mL,搖勻,即淀粉酶原 液。
吸取上述淀粉酶原液 1mL,加入 4mL 雙蒸水,搖勻,即為淀粉酶稀釋液,用于(α+β)淀粉酶總活力的測(cè)定。