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植物谷氨酸脫氫酶(GLDH)ELISA試劑盒操作方法

發布時間:2019-01-17   點擊次數:1157次

植物谷氨酸脫氫酶(GLDH)ELISA試劑盒

英文名稱:Plant GLDH ELISA Kit
實驗類型:夾心法
檢測范圍:0.375 U/L – 12 U/L
低檢測限:0.1 U/L

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被植物谷氨酸脫氫酶(GLDH)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物谷氨酸脫氫酶(GLDH)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

 

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

Elisa試劑盒標準曲線圖

(此圖僅供參考)

 

 

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。