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PGD2定量檢測方法,人前列腺素D2ELISA試劑盒

發布時間:2018-09-13   點擊次數:1811次

人PGD2定量檢測方法,前列腺素D2ELISA試劑盒

l  本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人前列腺素D2(PGD2)的含量。

l  有效期:6個月

l  保存條件:2-8℃

 

人前列腺素D2(PGD2)ELISA試劑盒實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人前列腺素D2(PGD2)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人前列腺素D2(PGD2)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

 

人前列腺素D2(PGD2)ELISA試劑盒樣本處理及要求

1.  血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3.  細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材

1.     酶標儀(450nm)

2.     高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒溫箱

4.     蒸餾水或去離子水

 

 

人前列腺素D2(PGD2)ELISA試劑盒問題解析:

1.試劑的選擇:選擇優良試劑大家都是知道的,但是在檢測之前還應該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍。

2.加樣中可能遇到的問題:在做血清或是血漿用于檢測試劑的時候,會碰到血清血漿不好分離的情況,這個時候的解決辦法是先放在常溫中1到2小時,然后在進行離心處理

3.洗板時容易造成誤差: 因為洗板是人工洗的,所以判斷什么時候洗干凈了也是人為判斷的,這個時候帶有主觀色彩,所以多清洗幾次,還有就是在洗的時候孔與孔之間的液體容易交叉流動

4.顯色問題: 使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長,都有可能造成顯色劑不顯色。所以在進行顯色反應的時候,要先查看顯色劑本身的情況

5.終止反應:在加終止劑的時候由于傾倒速度快,差生氣泡,造成假陽性結果。所以在倒終止劑的時候要緩慢倒

6.讀板:讀板的時候首先應該保證板的清潔干凈

試劑準備

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

 

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

 

試劑盒性能

1.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

2.  重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 。

注釋:本公司所有產品僅用于科研,不得用于臨床。